一、原理

嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中嘔吐毒素的殘留量。

二、適用范圍

定量檢測糧食、飼料等樣本中嘔吐毒素殘留。

三、嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒特點及技術(shù)指標(biāo)

* 檢 測 時 間 ： 30 min

  試劑盒靈敏度：5 ppb (µg/kg)

* 試劑盒檢測純陰性樣本的背景值＜2ppb

* 樣品處理方法更加簡潔，符合率大于90%

試劑盒檢測樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度：

試劑盒特異性：

四、所需材料

儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道50µL～300µL

試劑：去離子水、甲醇

五、 試劑盒組成

*注：A、B、C、D、E共5個標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0 ppb, 10 ppb, 30 ppb,90ppb, 270ppb, A、B標(biāo)準(zhǔn)品各1mL，其余各0.5mL，直接使用。

六、溶液配制

配液1: 洗滌工作液

用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋，用于酶標(biāo)板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫。

配液2:  1×嘔吐毒素樣品稀釋液     

用去離子水將2×嘔吐毒素稀釋液按1:1體積比進(jìn)行稀釋，用于樣本的稀釋，配好后在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫。

配液3:  樣品提取液

將甲醇與去離子水按V_甲：V_水=4:1 體積比配制成80%甲醇，即樣品提取液。

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應(yīng)及時進(jìn)行下步檢測，實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣。

花生粕、豬育肥料、乳豬料、牛飼料、玉米、全麥（稀釋倍數(shù)：20）

① 稱取樣品1.0g ± 0.05g至離心管中，加入

10 mL樣品提取液（配液3），震蕩提取1min；

② 4000rpm離心5min.；

③ 小心移取上清液500 μL 加到500 μL 1×嘔吐毒素樣品稀釋液中， 混勻，取50 μL用于分析。

八、 酶標(biāo)免疫測定程序

• 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回  升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
•  按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
•  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、酶、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL 到對應(yīng)的微孔中，加入嘔吐毒素酶標(biāo)物50µL /孔， 再加入嘔吐毒素抗體50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)20min。
•  洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，

加入洗滌工作液250µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

•  顯色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物    

液B液50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。

•  測定：加入終止液50µL/孔，用酶標(biāo)儀立即  測定450nm處的吸光度值（建議用雙波長450/630nm）檢測。

九、 結(jié)果判定

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中嘔吐毒素實際濃度。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件，以便進(jìn)行大量樣本的分析計算。）

十、 注意事項

① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

② 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。

④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到20min，反之則減短反應(yīng)時間。

⑥ 未提及樣本請致電本公司技術(shù)服務(wù)部。

• 貯藏條件及保存期

     貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個月